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G.灵芝原生质体的制备与再生

G.灵芝原生质体的制备与再生

实验试剂

溶壁酶

甘露醇的PDB肉汤

MYG琼脂培养基

实验设备

摇床

培养箱

实验步骤

1. 将菌丝体接种到含100 mL的PDB介质的容积250 mL瓶中(200g土豆,20g葡萄糖,1L水)。

2. 恒温28°C避光培养菌丝体,保持培养箱以50转/分的转速持续摇动。

3. 将培养物无菌纱布过滤灭菌。

4. 取大约5g菌丝体放于容积为50 mL 的试管中,试管中含20 mL已过滤灭菌的1.5%溶壁酶和0.6 M甘露醇(广东省微生物研究所,中国)。

5. 然后30℃孵育2h,期间不时搅拌。

6. 2 h后取出菌丝片段,放于MYG琼脂培养基中(2%麦芽提取物,0.2%酵母提取物,2%葡萄糖,1.5%琼脂),用于灵芝原生质体再生。

7. 稀释原生质体悬浮至浓度为1×10 4细胞/毫升,取50μL稀释后的原生质体悬浮液接种于MYG培养基中,25°C,避光培养。

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