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DAPI溶液详情介绍

DAPI溶液详情介绍

DAPI是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料。和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB(ethidium bromide)相比,对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。因为DAPI可以透过完整的细胞膜﹐它可以用于活细胞和固定细胞的染色。当DAPI与双链DNA结合时,zui大吸收波长为358nm,zui大发射波长为461nm。DAPI的发射光为蓝色,且DAPI和绿色荧光蛋白GFP或Texas Red染剂(红色荧光染剂)的发射波长仅有少部分重叠,可以利用这项特性在单一的样品上进行多重荧光染色。
DAPI溶液使用过程
(1)用1mLddH2O将DAPI溶解,制得2.9mM的DAPI溶液(1mgDAPI/1mL H2O)。 
注:DAPI不能直接用PBS等缓冲溶液溶解,需要先用水将其溶解。 
(2)取适量DAPI水溶液加到PBS中,制备成10~50µM的DAPI溶液。 推荐以下PBS的配制方法: 将8.00g NaCl、0.20g KCl、2.9g Na2HPO4·12H2O、0.2g KH2PO4溶解于1L纯水中。 
(3)将1/10培养基体积的DAPI溶液加入到细胞培养基中。也可以1/10浓度的DAPI缓冲液代替培养基。
(4)在37℃培养细胞10~20分钟。
(5)用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。
(6)用带有360nm激发波长,460nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。
注意事项
1)DAPI对人体有一定刺激性,请注意适当防护。
2)荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽量当天完成检测。
3)为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
 

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