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多克隆抗体的制备方法

多克隆抗体的制备方法

多克隆抗体(polyclonal antibody, pAb)是一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物,可刺激机体多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的不同抗体,所获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的混合物。多克隆抗体的制备步骤主要包括以下几个步骤:

一、用于免疫的动物

作免疫用的动物有哺乳类和禽类,主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等,实验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。动物种类的选择主要根据抗原的生物学特性和所要获得抗血清数量,如一般制备抗r-免疫球蛋白抗血清,多用家兔和山羊,因动物反应良好,而且能够提供足够数量的血清,用于免疫的动物应适龄,健壮,无感染性疾患,为雄性,此外还需十分注意动物的饲养,以消除动物的个体差异以及在免疫过程中死亡的影响。若用兔,用纯种新西兰兔,一组三只,兔的体重以2~3kg为宜。

二、免疫途径

   免疫途径多种多样,如静脉内、腹腔内、肌肉内、皮内、皮下、淋巴结内注射等,一般常用皮下或背部多点皮内注射。途径的选择决定于抗原的生物学特性和理化特性,如激素、酶、毒素等生物学活性抗原,一般不宜采用静脉注射。

三、佐剂

   由于不同个体对同一抗原的反应性不同,而且不同抗原产生免疫反应的能力也有强有弱,因此,在注射抗原的同时,加入能增强抗原的抗原性物质,以刺激机体产生较强的免疫反应,这种物质称为免疫佐剂。佐剂除了延长抗原在体内的存留时间,增加抗原刺激作用外,更主要的是,它能刺激网状内皮系统,使参与免疫反应的免疫活性细胞增多,促进T细胞和B细胞的相互作用,从而增强机体对抗原的细胞免疫和抗体的产生。常用的佐剂是福氏佐剂,其成分通常是羊毛脂1份、石腊油5份,羊毛脂与石腊油的比例,视需要可调整为1:2~9(V/V),这是不完全福氏佐剂,在每毫升不完全佐剂加入1~20mg卡介苗就成为完全佐剂。

四、抗血清的采集与保存

   羊等较大动物以颈静脉、动脉取血,鼠等小动物取血参阅相关资料。收集的血液置于室温下1h左右,凝固后,取血清,分装,4℃冰箱保存。

五、抗血清质量的评价

   在免疫期间,不仅各个不同的动物,而且同一动物在不同的时间内抗血清效价、特异性、亲和力等都可能发生变化,因而必须经常地采血测试。只有在对抗血清的效价、特异性、亲和力等方面作彻底的评价后,才可使用所取得的抗血清。

 

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