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活性蛋白1——集落刺激因子1

活性蛋白1——集落刺激因子1

通常来说,蛋白质基于其一级结构的氨基酸序列,可以用来作为免疫原使用;而其经过不同程度的折叠及空间排列后形成的空间构象则赋予了它特定的生物学功能,而在各种蛋白的不同生物学功能的共同作用下,就实现了生物的各种生理功能。所以对蛋白活性的研究是现在生物学和医学研究领域的热点,在研究中就需要使用到有活性的蛋白,而天然蛋白是很难获得的,所以现在所使用的活性蛋白也多是用基因工程的手段获得的。

基因工程的手段获取蛋白需要经过多个步骤,也有多种表达方式。要获取活性蛋白,在基因序列、表达系统以及活性验证等过程中都需要进行设计和选择。在蛋白研究过程中,也制备出多种活性蛋白。以其中的小鼠巨噬细胞集落刺激因子1colonystimulating factor 1, macrophage, MCSF)来说,在序列选择上,选取了蛋白除去信号肽外的胞外端,然后经过结构分析确定了重组蛋白的序列,Lys33~Ser204。对于蛋白表达体系的选择上,选择了原核蛋白表达体现,由于该体系表达的蛋白含有内毒素,所以在蛋白表达并纯化后,对其进行了内毒素去除,zui终蛋白内毒素含量低于1.0EU/μg

由于集落刺激因子在单核吞噬细胞,特别是巨噬细胞和单核细胞的增殖和分化过程中起重要作用,所以在对蛋白活性的验证过程中,我们采用了小鼠骨髓来源的树突状细胞(bone marrow derived dendritic cell, BMDC),再将细胞与MCSF共培养后对细胞进行镜检,发现相对于未添加MCSF的对照组,MCSF组的细胞数量显著增加,从而证明,表达的MCSF蛋白具有促进BMDC增殖的活性,见Fig.1

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