新闻资讯
首页 > 新闻资讯 > 免疫组化中的血清封闭原理

免疫组化中的血清封闭原理

免疫组化中的血清封闭原理

封闭血清没有也不应该和样品发生反应,应该是说,血清把没有包被 (coating)到的地方通通填满,以防止一抗乱吸附,所以封闭可以用二抗同物种血清,也可用 BSA 或 Gelatin,就是不能使用一抗同物种血清,因为里面含有同物种抗体,肯定会被二抗辨识。

先加一抗后再封闭的话,一抗就会结合到固相表面上,这种结合力是非特异性的疏水作用力,这种作用力是比较强的,经过处理的固相表面如硝酸纤维膜,酶标板对蛋白的吸附力更强,你再去封闭就没有作用了。
当然,也不是说封闭蛋白就完全不会封闭掉一抗的蛋白结合位点,在蛋白过量的条件下,蛋白质之间会有黏附和堆积作用,但这种作用通常是不稳定的。
如果你所选择的一抗与固相抗原亲和力较高,在适合的buffer条件下,一抗会竞争它的结合位点。蛋白质之间那点黏附和堆积作用力当然竞争不过它啦。

下面是从书上摘下的几句话,希望对你有帮助:

" 组织中非抗原抗体反应出现的阳性染色称为非特异性背景染色,zui常见的原因是蛋白吸附于高电荷的胶元和结缔组织成分上。zui有效方法是在用*抗体前加制备第 二抗体动物之非免疫血清(1:5~1:20) 封闭组织上带电荷基团而除去与*抗体非特异性结合。必要时可加入 2%~5% 牛血清蛋白,可进一步减少非特异性染色。作用时间为 10~20min。 也可用除制备*抗体以外的其它动物血清 (非免疫的)。有明显溶血的血清不能"

"对消除背景的非特异性染色有很好的效果。当然使用特异性高、效价高的
*抗体是zui重要的条件。"

"抗原-抗体是免疫球蛋白分子上的抗原结合簇与抗原分子上的抗原决定簇相互吸引以及多种分子间的引力参与发生的。这种反应没有化学键的形成。抗原-抗体的结合是可逆的“

简单说几句,封闭血清的原理主要有两点,*是待检样本会非特异性的和蛋白结合,从而导致背景过高,因此可以用BSA或血清封闭掉这部分非特异性的结合,从这点看,BSA和血清没有明显区别。第二是待检样本中可能会有Fc受体,可以和抗体恒定区结合,与抗体特异性无关,封闭血清中有抗体,因此用血清可以封闭掉一抗及二抗和样本Fc受体之间结合。BSA则无法封闭Fc受体。
不能用来自一抗同物种的血清举个例子就清楚了,比如一抗是鼠抗人的抗体,二抗是兔抗鼠的抗体,你要用鼠血清封闭的话,二抗就和封闭用的鼠血清里面的鼠抗体反应了,那不就假阳性了嘛。

文章资讯

  • 新闻资讯
  • 技术文章
    • 联系我们

      邮箱:shzeysw@163.com
    • 地址:上海市松江区国家经济开发区北松公路5629号聚科生物松江园区
    • 联系人:赵琼

    公司(www.shzysw.cn)提供:骨代谢试剂盒,小鼠白介素试剂盒,内分泌试剂盒说明书,检测试剂盒说明书,人白介素ELISA试剂盒说明书

    Copyright © 2016 All Rights Reserved 网站地图 技术支持:环保在线  备案号:沪ICP备16043273号-1  管理登陆

    分享到: