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ELISA竞争抑制法普遍存在的操作问题

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[ELISA竞争抑制法普遍存在的操作问题] 两对半使用elisa方法,其中HBSAg、HBsAb、HBeAg使用双抗原/抗体夹心法检测,而HBcAb、HBeAb使用竞争抑制法检测。 而竞争抑制法的原理:酶标抗体与样本抗体在同样的体系中,与固相抗原竞争结合是等比关系。原论上讲,应该先将 [ELISA 竞争 制法 普遍 操作 抗体 抗原 临界值]

两对半使用elisa方法,其中HBSAg、HBsAb、HBeAg使用双抗原/抗体夹心法检测,而HBcAb、HBeAb使用竞争抑制法检测。 而竞争抑制法的原理:酶标抗体与样本抗体在同样的体系中,与固相抗原竞争结合是等比关系。原论上讲,应该先将样本与酶标抗体先行混匀,然后加入反应也进行。但实际工作中并非如此,都是分开加入反应孔。这样会造成先加入的先结合,与后加入者并不是公平的关系,因而也不符合等比原则。特别是在放置时间长,且温度高的情况下,对结果有很大的影响。

第二军医大学长海医院对此造成的影响进行了研究。将阴性标本94份并用生理盐水进行1:30稀释,在加入标本后按下表时间放置后再加入酶标抗体,然后检测结果如下:

放置时间(min)阴性标本数临界值-标本A450nm值假阳性率(%)<0.30.3~0.7>0.70751036026813767.4565158610.6105616121020.2203818172139.3302112184357.4

从上表可以看出,如果同时加入标本与酶标抗体,没出现假阳性现象。2分钟后再加入酶标抗体,由于标本比酶标抗体先结合了两分钟,因此出现了7.4%的假阳性。30分钟后再加,假阳性高达57.4%。因此建议竞争抑制法的项目,加十个样本后立即加酶标抗体,这样对检测结果没有影响。

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