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ELISA实验方法汇总

点击次数:898 发布时间:2016/11/2
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ELISA实验方法汇总

ELISA实验步骤:

1、试剂准备:根据选择的试剂盒准备好相关试剂。

2、样品准备:血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织标本等。

3、试剂的配置

4、抗体包被:Coating Buffer: 稀释成Coating Buffer (1×),根据产品说明书稀释抗体,每孔加入100ul预稀释的抗体,4°C过夜孵育(16-18h)。

5、使用前,将所有试剂充分混匀,避免产生泡沫。 

6、根据实验孔(空白和标准品)数量,确定所需的板条数目。样品(含标准品)和空白都应做复孔。 

7、加样:100  μL/well 加入稀释后的 Cytokine   standard 至标准品孔,100  μL/well 加入样

品至样品孔,100  μL/well 加 Dilution buffer R (1×)入空白对照孔。 

8、加检测抗体:根据产品说明书加入 Biotinylated antibody 。 混匀后盖上封板膜,室温孵育。 

9、洗板:扣去孔内液体,300 μL/well 加入 1×washing buffer;停留 1 分钟后弃去孔内液体。重复 3 次,每一次在滤纸上扣干。 

10、加酶:根据产品说明书加入稀释好的酶,孵育。 

11、洗板:重复步骤 5 。 

12、显色:100 μL/well 加入 TMB,室温(18-25℃)避光孵育5-30分钟之间,根据孔内颜色的深浅(深蓝色)来判定终止反应。 通常显色 10-20 分钟可以达到很好的效果。 

13、终止反应:迅速 100 μL/well 加入 Stop solution  终止反应。

14、读板:终止后 10 分钟内,用检测波长(measurement wavelength)450 nm 读值。推荐用双波长即检测波长(measurement wavelength)450 nm 、参考波长或校正波长(reference wavelength )610-630 nm 同时读板,测量结果会更准确。

 

 

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