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小鼠胰岛瘤细胞 (MIN6)

点击次数:851 发布时间:2016/11/2
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小鼠胰岛瘤细胞

MIN6

 

细胞特性

1) 来源:小鼠胰岛瘤

2) 含量:>1x106 个/mL

3) 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

4) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装

运输和保存:可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式:1干冰运输,收到后立即转入液氮冻存或直接复苏;2存活细胞收到后应继续生长传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途:仅供科研使用。

细胞培养步骤

一. 培养基培养冻存条件准备:

1) 准备1640培养基;澳洲胎牛血清,10%双抗1%;添加50uMβ-巯基乙醇。

2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液90%血清10%DMSO现用液氮储存。

二. 细胞处理

1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,离心管加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4-5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中培养,补加培养基至6ml。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%可进行传代培养

对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子PBS润洗细胞1-2

2. 加1ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2ml完全培养基终止消化

3. 轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1:2到1:5比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中

3)细胞冻存:细胞生长状态良好时,进行细胞冻存

下面T25瓶为例;

      1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。

      2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至zui终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。

3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

 

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