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购买到小鼠原代细胞后需要做哪些工作?

  小鼠原代细胞是指从机体取出后立即培养的细胞。有人把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养。对原代细胞最直观的理解,就是不能无限传代下去,不论你是自己提取的细胞还是从试剂公司购买的细胞,都会建议你在P2-P3代完成实验是*。所以,掌握提取和培养小鼠原代细胞的技巧,尽可能地让细胞的好状态多维持几代,对实验成败来说至关重要。那么对已经购买的细胞之后应该注意什么注意事项呢
 
  1. 收到细胞时,要镜下观察是否有污染情况;收到细胞的前几天,要做好各种倍数的镜下拍照记录,以防细胞出现问题后,可以跟公司很好地沟通。
 
  2. 收到细胞后,不要马上处理。应置于培养箱中静置4h以上再操作。如果不着急,可静置过夜。
 
  3. 细胞的第一次传代,一定要密度高一些传代,原代细胞传代密度低,很难长起来。建议1:2-1:3传代。
 
  4. 原代细胞传代时(内皮细胞,贴壁为例),0.25%+0.53nM的胰酶消化,1ml消化液37度培养箱内消化30sec,再加入5ml培养基(正常消化贴壁细胞,我们使用胰酶和培养基的量是1:1,但是原代细胞必须用大量培养基中和胰酶)。
 
  5. 原代细胞不建议冻存,因为冻存很容易复活不成功。如果要冻存的话,建议在P2或P3代冻存,冻存液中的血清越多越好,建议比例9(血清):1(DMSO)。
 
  6. 原代细胞复苏时,置于37-38度水浴融化细胞,并加入10ml培养液(正常贴壁细胞复苏时,也可以使用这种比例,复苏成活率会大大提高),离心重悬铺板。

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