技术文章
首页 > 技术文章 > 小鼠原代细胞的取材步骤讲解

小鼠原代细胞的取材步骤讲解

  将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。
 
  小鼠原代细胞培养的步骤一般是:取材→分离→培养和维持,今天我们重点介绍原代细胞的取材。
 
  人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件,直接影响细胞的体外培养。
 
  取材的基本要求:
 
  ① 取材要注意新鲜和保鲜
 
  ② 应严格无菌
 
  ③ 防止机械损伤
 
  ④ 去除无用组织和避免干燥
 
  ⑤ 应注意组织类型、分化程度、年龄等
 
  ⑥ 作好记录
 
  各类组织的取材技术:
 
  ① 皮肤和粘膜的取材
 
  主要取自于手术过程中的皮片,方法似外科取断层皮片手术操作,但面积一般2~4平方厘米。
 
  ② 内脏和实体瘤的取材
 
  内脏除消化道外基本是无菌的,但取材时要明确和熟悉所需组织的类型和部位,实体瘤取材时要取肿瘤细胞丰富的区域,要避开破溃、坏死液化部分,以防污染,尽量去除混杂的结缔组织。
 
  ③ 血液细胞的取材
 
  血细胞、淋巴细胞的取材,一般多抽取静脉外周血,或从淋巴组织中(如脾、扁桃体、胸腺、淋巴结等)分离细胞,取材时应注意抗凝。
 
  ④ 骨髓、羊水、胸/腹水细胞取材
 
  严格无菌,注意抗凝,还要尽快分离培养,离心后,用无钙、镁PBS洗两次,再用培养液洗一次后即可培养,不宜低温存放。
 
  ⑤ 动物组织取材
 
  I 鼠胚组织取材
 
  首先用引颈或气管窒息致死法处死孕期合适的动物,然后将其整个浸泡在含有75%酒精的烧杯中,5分钟后(注意时间不能太长,以避免酒精从口或其他通道进入体内,影响组织活力),取出动物,在消毒过的木板上可用无菌的图钉或大头针固定四肢,切开皮肤,用无菌操作法解剖取胚或用无菌止血钳挟起皮肤、用无菌眼科剪沿躯干中部环形剪开皮肤,用止血钳分别挟住两侧皮肤拉向头尾,把动物反包,暴露躯干,然后再固定,更换无菌解剖器材,采用无菌操作法解剖取出胚胎。
 
  II 幼鼠胚肾(或肺)取材
 
  幼鼠采用上述方法处死消毒后,腹部朝上固定在木板上,先切开游离毛皮并拉开至两侧:然后采用无菌法打开胸腔取肺,或背部朝上固定在木板上,先将背部毛皮切开游离并拉向两侧,然后采用无菌法从背部打开腹腔取肾。
 
  ⑥ 鸡(鸭)鸟类胚胎组织取材步骤
 
  1、取孵化至适当胚龄(9~12天)的胚蛋,用照蛋灯在暗处灯检,若有丰富血管、胚体有运动的胚蛋,说明胚体发育良好,并用有色笔划出气室和胚体位置。
 
  2、将胚蛋置于蛋架上,先用温水清洗蛋壳,再用75%酒精棉球擦干;
 
  经碘酒、75%酒精消毒后,在无菌条件下采用无菌法用剪刀或镊子打开气室,沿气室边缘去除蛋壳;
 
  3、用眼科镊撕去壳膜,暴露出鸡胚;
 
  4、用弯头镊轻挑起胚头,取出胚胎,放入无菌平皿中,解剖取材。

文章资讯

  • 新闻资讯
  • 技术文章
    • 联系我们

      邮箱:shzeysw@163.com
    • 地址:上海市松江区国家经济开发区北松公路5629号聚科生物松江园区
    • 联系人:宛双凤

    公司(www.shzysw.cn)提供:骨代谢试剂盒,小鼠白介素试剂盒,内分泌试剂盒说明书,检测试剂盒说明书,人白介素ELISA试剂盒说明书

    Copyright © 2016 All Rights Reserved 网站地图 技术支持:环保在线  备案号:沪ICP备16043273号-1  管理登陆

    分享到: