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酶联免疫检测试剂盒测试原理

   酶联免疫检测试剂盒测试原理
  酶联免疫检测试剂盒的基本原理有三条:
  (1)抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫学活性;
  (2)抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性;
  (3)酶结合物与相应抗原或抗体结合后,可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在,而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的,因此,可以按底物显色的程度显示试验结果。
  由于酶联免疫检测试剂盒一方面是建立在抗原与抗体免疫学反应的基础上,因而,具有特异性。而另一方面又由于酶标记抗原或抗体是酶分子与抗原或抗体分子的结合物,它可以催化底物分子发生反应,产生放大作用,正因为此种放大作用而使本法具有很高的敏感性。因此,酶联免疫检测试剂盒是一种既敏感又特异的方法。
  以人白介素6(IL-6)为例,说明ELISA实验检测原理。本实验采用双抗体夹心ELISA法。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒(ELISA)。预先包被的抗体为抗人白介素6(IL-6)单克隆抗体。检测相抗体为多克隆抗体,经生物素(biotin)标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后,PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。

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