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封闭用脱脂奶粉的常见问题

封闭用脱脂奶粉的常见问题

脱脂奶粉可用于制备微生物培养基;配制ELISA、western等实验的封闭液。western blot经过转印以后,膜上有了蛋白,但是还有很多地方是没有蛋白覆盖的,通过脱脂奶粉的蛋白孵育后,这些空白的膜都被脱脂奶粉的蛋白覆盖了,就防止后续孵育的一抗和二抗与印迹膜的非特异结合。在科研实验中,脱脂奶粉也是常用的生化试剂之一。
关于脱脂奶粉和BSA作为封闭剂的一些问题
问:western blot 中脱脂奶粉封闭的是哪些蛋白?原理是什么?
答:脱脂奶粉中主要是乳清蛋白和酪蛋白。原理就是用非抗原 的蛋白去封闭膜,避免标记抗体固定在膜上引起背景增高。
问:请问封闭液和抗体稀释液用BSA 和脱脂奶粉有什么区别呢?
答:所谓封闭是用以减少或消除载体上的非特异性结合蛋白的分子,一般是脱脂奶粉或BSA。对WesterBlot来说两者均为常用封闭剂。脱脂奶粉的成份远较BSA复杂,如果要做ELISA或者phage display时候,我们还是用BSA。我推测也没有依据说脱脂奶粉就不能用,注意的是各种品牌的脱脂奶粉中残留的脂质量不同, 脂质是会影响实验结果的,即使是用于WesterBlot也要有所挑选。
问:封闭的时候,为什么一定要用脱脂奶粉?
A:膜上有蛋白缺损点,不用蛋白封蛋白缺损点容易出现非特异染色。也可用BSA 封,效果并不比脱脂奶粉好。
问:western封闭为什么用脱脂牛奶,不用全脂的
答:是因为如果含有脂肪的话,乳脂会与奶粉中的蛋白结合,导致封闭的时候蛋白浓度下降,影响封闭的效果,有可能造成封闭不完全,所以都会用脱脂的奶粉来做。
 

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