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活化的caspase 3的检测

活化的caspase 3的检测

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶) 是近年发现的一组存在于细胞质中,活化位点均含有半胱氨酸,且特异性断开天冬氨酸残基后肽键的蛋白酶。Caspase在细胞程序性死亡(又称凋亡,apoptosis)中起重要作用。迄今为止,已经发现的人的caspase家族成员已达12种。

Caspase 3 是caspase家族的一个重要成员,其在细胞凋亡过程中作为zui主要的终末剪切酶行使作用。该蛋白由pro-caspase 3 酶原经过进一步的加工而形成,pro-caspase 3 是一个含有277个氨基酸残基的前体蛋白,对其结构进行分析,可以分为以下四个部分:*部分是含有第1-9aa的前肽,第二部分是含有第10-28aa的前肽,第三部分是包含29-17a的大亚基,称为p17,第四部分是包含176-277aa的小亚基,称为p12 (图1)。在凋亡开始时,pro-caspase3酶原可以被内源性的颗粒酶B和外源性的细胞色素C等因素激活,使其在Asp28~Ser29和Asp175~Ser176两处被剪切,形成p17和p12两个亚基。此后,两种亚基再组成具有活性的caspase 3,活化的caspase 3是含有2个p17亚基和2个p12亚基的异源四聚体,它可以通过对其主要的底物:多聚 (二磷酸腺苷-核糖)聚合酶 (poly (ADP-ribose)polymerase, PARP) 等进行剪切而诱导细胞凋亡的进行。

由于Caspase 3在凋亡过程中行使重要作用,并且其需要以活化的形式发挥功能,所以,对活化的caspase 3以及其活性的检测就十分重要,公司针对Caspase 3的两个亚基分别进行了序列分析、基因克隆和蛋白表达,获得

了Caspase 3的两个亚基的蛋白,其货号分别为:和。在细胞凋亡的研究过程中,研究者可以同时使用p17 这两种亚基蛋白,使其在试验体系中组装成为活化的Caspase 3,并发挥其在细胞调亡过程中的作用。

用这两种蛋白作为免疫原分别免疫小鼠和兔后,获得了单克隆抗体和多克隆抗体 。这些抗体可用于对pro-caspase 3的活化程度的定量或半定量检测。图2是一组通过Western blot对pro-caspase 3和p17/p12亚基含量的对比分析来确定Caspase3在实验过程中活化的进程和速度的实验数据。

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