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ELISA试剂盒标本的处理方法及保养技巧

 一、ELISA试剂盒保存要求:
对收集后当天就进行检测的样本,及时储存在4℃备用。对于隔天再检测的样本,及时分装后冻存在-20℃备用,有条件的,-70℃冻存备用。
二、ELISA试剂盒常见液体标本的处理方法:
液体类标本:包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
①血清:室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
②尿液:用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
③组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
三、ELISA试剂盒标本处理注意事项:
(1).均质:
①组织样本:肉、肝食品类切细,用绞肉机反复绞碎,混合均匀。
②水产样本:去除样品的非食用部分,食用部分切细,用均质器均浆;原料表面较脏时,需适当用蒸馏水清洗。
③蛋类:鲜蛋去壳,蛋黄和蛋白充分混匀。
④水果、蔬菜类:先用水洗去泥沙,然后除去表面的水分,取食用部分。
(2).振荡提取:
将提取溶剂加入到装有样品的具塞容器中,振荡,使提取溶剂与容器内的样品充分接触以深入到样本组织内部,提取待测组分。
①振荡方式:振荡器上进行上下、往返式振荡、手摇式上下振荡。
②在组织样本中加入有机溶剂之间提取时,应边加边振荡,防止组织凝结成团,不利于提取。
(3).乳化现象:
在用有机溶剂提取过程中,如果出现乳化现象,解决的方法有:
①用细头轻轻的搅拌,破坏乳化后,再重复离心。
②再加入适量的提取剂,重新振荡。注意离心后要保证样本的稀释倍数不变。
(4).浓缩:
由于净化过程中引入的溶剂,可能会降低待测组分的浓度或者不适宜直接分析,需要去除全部有机溶剂。即试剂盒前处理步骤中把样本在60℃氮气下吹干,再用复溶液溶解干燥残留物。
浓缩方式:氮气吹干除杂、压缩空气吹干除杂。
请注意:
①在吹干样本之前,用甲醇清洗针头,防止杂质干扰。
②在吹样本时,针头应在液面上空,避免与样本接触,防止产生交叉污染。
③样本吹干后应立即取下,避免吹的时间过长,影响zui终检测结果。
④不同的药物,吹干后样本的保质期不同,提倡待样本回到室温后立即复溶。
(5).净化:
经过提取的待测组分中通常含有一些会干扰试剂盒中抗原抗体反应的杂质或者是含有与待测物结构相似的杂质。将待测组分与杂质分离的过程,我们称为试剂盒中样本的净化。在我们现有的试剂盒前处理方法中涉及到的zui常见的净化是:液液分配法。
 

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